Elle est logée dans un immense espace voûté de 30 mètres sur 9 et de près de 11 mètres de haut. Elle est située sous le Patio de los Evangelistas, dans la partie orientale du cloître, et est éclairée par le patio à travers cinq fenêtres au niveau du sol. La pièce centrale est un beau miroir avec un cadre baroque en argent et des accents en cristal de roche, cadeau de la reine Mariana d'Autriche (la mère de Charles II), et il y a six autres miroirs plus petits, espacés de manière appropriée et dont les cadres en argent sont travaillés de manière experte. Le sol est fait de marbre blanc et gris, et la voûte est décorée de grotesques. Niccol Granello et Fabrizio Castello ont créé les immenses plafonds à caissons avec une variété d'ornements entre les bandes en relief.

Elle possède une excellente collection d'œuvres d'art, notamment des pièces de Luca Giordano (Christ crucifié), du Titien (Christ dans la prière du jardin), de José de Ribera (Saint Pierre en prison), de Michel Coxcie (La Vierge, l'Enfant Jésus et Sainte Anne lui offrant un fruit), de Herrera Barnuevo et du faux prophète Balaan (Saint Jean Baptiste) de Luca Giordano. L'Adoration de la forme sacrée, chef-d'œuvre du madrilène Claudio Coello, se distingue de toutes ces œuvres. Il dépeint la cérémonie religieuse qui s'est déroulée le 19 octobre 1680, pour le transfert solennel de la Sainte Forme d'un autre endroit du monastère à sa nouvelle chapelle dans la sacristie. La composition est admirable tant au niveau de la perspective que de la maîtrise des figures représentées : Charles II, qui est agenouillé, le Père Fray Marcos de Herrera,

L'œuvre de Coello, qui sert de voile ou de transparent pour le Saint-Sacrement et qui n'est enlevée qu'une fois par an, recouvre entièrement l'autel (le dernier dimanche de septembre). Le tableau est ensuite retiré du sol, révélant le magnifique crucifix, créé par Pietro Tacca, avec la figure du Christ modelée de manière exquise et coulée en bronze doré au feu, ainsi qu'un grand temple, également doré au feu, de style gothique-germanique, d'une hauteur de 1,60 mètre et conçu par Vicente López, qui a été commencé en 1829 par Ignacio Millán et achevé en 1834. Elle est ornée de quarante statuettes et de dix bustes et renferme de nombreux objets. Malheureusement, l'un des joyaux qui a disparu en 1936 était le très coûteux ostensoir d'Isabelle II, cadeau de la reine en 1852, façonné à Madrid par Carlos Pizzala avec un magnifique travail d'orfèvre et serti de pierres précieuses. Derrière le retable en marbre et bronze de la sacristie se trouve la loge, créée par Francisco Rizi, José del Olmo et Francisco Filippi.